称取适量的葡萄籽提取物用一定体积的甲醇溶解,最后葡萄籽提取物溶液的浓度为0.1mg/mL左右。取样品溶液1mL加到10mL比色管中,然后依次加入2.5mL香兰素甲醇溶液(1.0% W/V),2.5mL 25%硫酸甲醇溶液。室温下反应15min,在510nm测定其吸光度。
以儿茶素作为对照品,配制不同浓度的溶液,按上述方法反应,测得吸光度,以吸光度对浓度绘制标准曲线。由标准曲线可求得提取物中黄烷-3-醇的含量。
香兰素检测法测定葡萄籽提取物中黄烷-3-醇一般是用甲醇溶解提取物,配制试剂。另外也可用冰醋酸溶解提取物,配制试剂,但二者测定的数据有很大差异。用甲醇作溶剂时,香兰素法测定的是总黄烷-3-醇的量,对于聚合原花青素中所有的黄烷-3-醇的量都能发生此反应。而用冰醋酸用溶剂时,香兰素法测定的是单体黄烷-3-醇和聚合原花青素末端黄烷-3-醇的量,而聚合原花青素中间的黄烷-3-醇不能被测出。而大多用甲醇作溶剂来测定葡萄籽提取物中黄烷-3-醇的量。同时采用两种溶剂可大概测出提取物中原花青素的平均聚合度。